改进SD大鼠脑脊液穿刺抽取收集技能

原标题：改进SD大鼠脑脊液穿刺抽取搜集技能

脑脊液是动物试验研讨中经常用到的标本，在脑损伤机制、生物标志物、药物医治等研讨范畴有着不行代替的研讨价值百科，可是鼠的脑室及蛛网膜下腔狭小，其内血管又很丰厚，导致脑脊液提取进程杂乱，且简略刺穿延髓致使大鼠逝世，因而脑脊液搜集的低成功率成了许多研讨者面对的技能难题。本研讨通过查阅文献，并在以往报导的脑脊液搜集办法的根底上加以改进，为无脑脊液搜集经历的初学者供给了一种精确、便利、快速、无血污染的大鼠脑脊液搜集技能。

一、试验资料

1.试验动物 选取SD大鼠20只，体重300～400g，由上海试验动物中心供给。

2.试验器械 脑立体定位仪，微量进样器(100μl)，水合氯醛，手术器械，冷冻离心机(CT15RE)。

二、试验办法与成果

(一)试验办法

7％水合氯醛腹腔麻醉大鼠。动物麻醉后，将脑立体定位仪耳杆紧贴双耳别离刺进两外耳道，固定耳杆于主框上，并使两侧耳杆读数相同。将大鼠的上门齿勾住门齿杆，固定上颌。将门齿杆升高。使大鼠头部与躯体约成135°(图24-1)。于大鼠头枕部剪毛、消毒，沿后正中线切一纵行切断(1.5～2cm)。翻开皮肤后，会看见枕骨隆凸后有一倒三角形的肌肉空隙，用微量进样器的针尖部抵住三角形洼陷的底部沿后正中线下滑，至枕骨大孔后进针，针尖斜面向上，并与身体平行，即针与头部的视点约为135°(图24-2)。留意进针速度不宜过快。当针尖透过黄韧带时，有显着的失败感。此刻针尖即进入延髓池(深度约0.2mm)。中止进针。左手固定针头部不动，右手缓慢抽取脑脊液，此刻应留意抽取速度一定要慢，不然有可能会呈现血性脑脊液。抽取后敏捷退针，将脑脊液移入0.5ml的 EP管中，离心后于液氮或许干冰中速冻并移入-80℃冰箱保存。脑脊液搜集后，动物可根据需求于皮肤缝合后持续养殖或许处死进行后续选材研讨等。

(二)判别规范

将搜集到的脑脊液于20min之内，4℃、2000g离心10min。假如脑脊液为淡红色，标明是血性脑脊液并发作溶血：假如EP管底部有红色沉积，标明是血性脑脊液，但未发作溶血。呈现血性脑脊液的样品判为不合格。

(三)成果

在20只大鼠中，成功抽取脑脊液的有18只，离心后脑脊液呈清亮通明状，未呈现红色沉积现象。一般一只大鼠可抽取80～120μl脑脊液，体重稍大的大鼠能抽取到120～140μl脑脊液。有2只呈现了血性脑脊液，但离心后仍能取得80μl以上的清亮脑脊液。

三、评论

因为脑脊液成分能够间接地反映脑安排的状况，因而脑脊液中相关成分的剖析是动物试验中经常用到的技能。可是因为脑脊液搜集办法和技能的约束，常常成为动物试验研讨中的难题。怎么能在搜集足够脑脊液的状况下防止血性污染成为脑脊液成功抽取的要害。 在很多以往报导的脑脊液搜集办法中。血性脑脊液的呈现往往是困扰研讨人员的要害问题。特别是关于初学者来说，快速把握一种有用的脑脊液搜集办法是展开后续研讨的要害。现在国内外报导的搜集脑脊液的办法主要有以下几种：经皮直接穿刺延髓池抽取法、直视下经硬脊膜穿刺延髓池抽取法、直视下划破硬脊膜抽取法等。

笔者研讨小组在既往报导的根底上，将抽取办法做了调整，树立了更适合初学者的办法。该办法与直接经皮抽取脑脊液的办法比较，微量进样器抽取的方位更简略把握，减少了操作误差。该办法与翻开皮肤和肌肉，直视状况下抽取脑脊液的办法比较，因为仅仅将皮肤剪开，防止伤及肌肉，因而减少了因肌肉出血而导致污染的可能性。一起关于初学者来说，因为不熟练而呈现第1次进针未能顺畅抽出脑脊液的状况时，因为肌肉的缩短和关闭功用，能够在第2次或许第3次调整针头方向或许方位。防止了在直视状况下第1次未能成功抽出脑脊液，退针后脑脊液外流严峻而不能再次抽取无污染样本的状况。别的，当动物需求持续养殖时，只翻开皮肤经肌肉穿刺延髓池抽取脑脊液的办法与翻开皮肤和肌肉直视状况下抽取法比较，其具有有创规模小、动物康复快等明显长处。

综上所述，作者通过探究树立的翻开皮肤经肌肉穿刺延髓池抽取脑脊液的办法具有简略、方便、高效等长处，是一种较好的搜集脑脊液的办法，特别适用于无脑脊液搜集经历的初学者。

来历：《神经疾病动物模型制备理论与技能》

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诺恩诺德比较医学中心负责人黎立博士，原为中国人民解放军总医院第八医学中心比较医学中心（试验动物中心）负责人，曾参加国家“十二五”、“十三五”专项课题10余项，曾参加国家自然科学基金项目20余项，曾参加完结国家自然科学基金课题10余项，参加完结戎行科研课题20余项；取得国家发明专利8项，宣布学术论文30余篇。

黎立博士师从郑兆荣教授，郑兆荣教授为吉林大学（中国人民解放军农牧大学）教授、病理解剖学教研室主任、第六届全国政协常委，长时间从事病理形态学的研讨。一起，黎立博士也与临床医学相关院士保持着杰出的协作伙伴关系。

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